초음파 처리에 대해 알아야 할 것들
초음파 처리은 이미 분자 세포, 세포질, 미생물학 및 기타 실험실에서 열린 세포를 찢어내는 데 널리 사용되었습니다. 세포 또는 그 완충액의 화학적 조성은 초음파 처리 과정 동안 변하지 않고 세포의 전하가 전기 천공 공정 에서처럼 변하지 않는다. 초음파 분쇄는 아주 간단한 방법이며, 실험 및 세포 유형에 따라 몇 가지 팁을 따라야합니다.
과정
처음에는 적합한 완충액 또는 배지에 세포 분산액을 준비하고, 추가 냉각을 위해 얼음 또는 얼음 물의 비이커에 분산액을 넣으십시오. 초음파 장치의 노즐을 물로 헹구고 Kimwipe로 건조시킵니다. sonication 또는 셀 Disruptor 기계를 켜고 세포 유형과 실험 조건에 따라 출력 값을 적절한 값으로 설정하십시오. 세포 샘플 튜브에 초음파 처리의 노즐을 담그고 초음파를 5 ~ 30 초 동안 수행하기 위해 초음파기를 켜십시오. 30 초 이상의 초음파 처리로 샘플이 과열되거나 손상 될 수 있습니다. 볼륨의 다른 부분을 모두 잘 음파 처리 할 수 있도록 초음파 처리 과정에서 샘플 튜브를 노즐 주위로 천천히 움직일 수 있습니다. 게다가 노즐 팁이 볼륨 표면 가까이에 닿지 않도록해야합니다. 샘플 버블 링이나 거품이 생길 수 있습니다. 첫 번째 초음파 처리의 완료 후, 그것을 섞기 위해 샘플을 반전하고, 얼음에 냉각되는 샘플과 다른 시간 동안 다시 샘플을 초음파 처리.
최적화가 중요합니다.
다른 세포주의 경우, 일반적으로 다른 최적화 된 초음파 프로토콜이 존재합니다. 잘 찢어진 세포와 손상되거나 변성 된 세포 사이의 이상적인 균형을 확인해야합니다. 최적화 된 프로토콜은 초음파 처리 시간과 출력 전력 설정을 조정 한 다음 분획을 위해 현미경을 사용하여 세포를 검사하여 얻을 수 있습니다. 예를 들어 출력 파워 설정을 50 %로 설정 한 상태에서 5 초 초음파 처리를 3 번 수행 할 수 있습니다. 세포 개체군의 일부가 손상되거나 변성 된 경우에는 초음파 처리 시간과 출력을 높일 수 있습니다.
구체적인 예
E. Coli 세포를 예로 들어 보겠습니다. 대장균 세포는 표면 수용체 결합 단백질 (클로스 트리 디움 퍼프 린겐 스 엔테로 톡신의 C- 말단 단편, 또는 “C-CPE”)의 성장 및 정제에 집중적으로 사용된다. 소닉 톤을위한 최적화 된 프로토콜은 다음과 같습니다. 셀 볼륨 – 7 ~ 10mL; 시간 – 두 개의 30 초 버스트; 출력 전력 : 최대 출력 전력. 세포 분산 완충액은 1x PBS와 0.2mg / mL 리소자임을 손상시킵니다.
또한, E.coli 세포의 초음파 처리를위한 초음파 처리 기계는 초음파 셀 디스 리더 (Ultrasonic Cell Disruptor) 이다.
